ЭТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО ЭКСПЕРИМЕНТА

Аннотация

В статье изложены принципы Международной Биоэтической Концепции, содержащей основные правила обращения с лабораторными животными. Рассмотрены преимущества использования неинвазивных (не травмирующих животных) методов исследования в физиологическом эксперименте, обсуждены этические, социальные и правовые аспекты физиологического эксперимента и их тесная связь с проблемой гуманного отношения человека к животным в современном обществе.

Полный текст

Известно, что наиболее травматичными воздействиями при проведении физиологического эксперимента являются жесткая иммобилизация животных, использование болевых раздражений, применение поведенческих тестов, невротизирующих подопытных животных, неадекватные способы локализации и точного выключения компактных ядер мозга, послеоперационного ухода и реабилитации подопытных животных [1, 2, 3, 4]. Указанные инвазивные экспериментатальные воздействия на изучаемый живой организм вызывают его физическое повреждение и/или психические травмы, сопровождаемые развитием у подопытных животных негативных физиологических, биохимических и психических ре-акций, наблюдаемых на клеточном, органном, системном и поведенческом уровнях, что приводит к резкому снижению адаптационных возможностей организма, возникновению стрессорных реакций, неврозов, развитием патофизиологических состояний отдельных органов и функциональных систем организма, инвалидности, или летальности подопытного животного, а также неоправданному увеличению числа животных, используемых в эксперименте. В соответствии с международными законодательными актами [5, 6, 7, 8] применение инвазивных воздействий и процедур при изучения нормальных физиологических функций животных без использования специально разработанных альтернативных нетравматичных методов исследования является недопустимым, а результаты поведенческих исследований, выполненных при их использовании, должны признаваться недостоверными. Принимая во внимание то обстоятельство, что в нашей стране до сих пор не принят Федеральный закон, регламентирующий этические нормы использования животных, в том числе и для научных исследований, важной задачей является ознакомление молодых исследователей с принципиальными положениями, лежащими в основе международных правил этического проведения экспериментальных исследований на животных, знание которых является необходимым для выполнения экспериментальных исследований как в отечественных, так и в зарубежных научных лабораториях. Учитывая приоритет международных норм биоэтики, а также рост числа исследователей, собирающихся выполнять исследования за рубежом, рассмотрим основные правила этического обращения с животными в зарубежных лабораториях на примере Великобритании, известной своими традициями гуманного отношения к животным2. Первой официальной процедурой, которую необходимо пройти исследователю, приглашенному работать в Великобританию, является оформление разрешения работать с экспериментальными животными. В соответствии с Государственным Законом, принятым в Британии в 1986 году (Animals 2Автор благодарит проф. Л. Вейскранца (L. Weiskranz, UK ) за приглашение провести экспериментальные исследования в Оксфордском Университете и возможность ознакомиться с историей развития биоэтики и правилами этического обращения с животными в Великобритании. 23 Scientific Procedures Acts, 1986), для проведения экспериментальных исследований необходимо получить специальную лицензию-сертификат для работы с животными, которая выдается Министерством Внутренних Дел Великобритании. В лицензии четко оговариваются тема исследования, вид подопытного животного, их количество и перечень при строгом соблюдении установленных законом этических правил. Следует подчеркнуть, что лицензия не является пожизненной, она выдается экспериментатору на определенный условиями работы срок и является именной, то есть никакой другой исследователь, кроме самого лицензиата, не имеет право на проведение оговоренных экспериментальных процедур. В соответствии с установленными международными требованиями Европейской Федерации Научных Ассоциаций по Лабораторным Животным - FELASA (1995) лицензия для работы с лабораторными животными может выдаваться лишь дипломированным специалистам, имеющим законченное медицинское, биологическое, или ветеринарное образование и прошедшим специальный курс практических занятий с лабораторными животными. За соблюдением правил работы с животными и установленных этических норм наблюдает Инспекция Министерства Внутренних Дел, представители которой регулярно проверяют условия содержания животных, строго контролируют работу исследователя и имеют право при обнаружении грубых нарушений (использование экспериментатором инвазивных процедур, связанных со страданием животных) наложить штраф, остановить работу, аннулировать выданную лицензию, или привлечь к уголовной ответственности, предусматривающей лишение свободы на срок от 6 месяцев до 2 лет. Кроме Инспекции Министерства Внутренних Дел за соблюдением установленных правил работы с подопытными животными наблюдает Комитет по этике научного учреждения, в котором проводится экспериментальные исследования. Комитет учреждения, в состав которого, наряду с административными работниками учреждения входят ветеринарный врач, ученые - эксперты, а также представители общественности (обычно священнослужитель и/или учитель), следит за недопустимостью использования в экспериментах инвазивных методов иссл-дования, устраняет выявленные нарушения с помощью предоставленных ему административных полномочий, а также стимулирует разработку и внедрение научными сотрудниками нетравматических методов исследований. Следует отметить, что создание и внедрение неинвазивных атравматических устройств и технологий для улучшения условий проведения экспериментов на лабораторных животных, их хирургического лечения и послеоперационной реабилитации является важным, но не единственным направлением работы ученых. В настоящее время Международными организациями, осуществляющими разработку правил обращения с лабораторными животными принята и активно поддерживается так называемая Биоэтическая концепция «3 R» [9, 10, 11], содержащая три основных раздела, или направления работы: Refinement - улучшение условий про-ведения экспериментов и, как следствие, устранение, или снижение стресса лабораторных животных с помощью разработки и использования неинвазивных технологий и устройств [3, 4]; Replacement - замена в опытах эволюционно высокоорганизованных животных (приматы, собаки, кошки) менее организованными (грызуны, беспозвоночные), или использование соответствующих наглядных пособий, физических и математических моделей, в том числе компьютерных программ и видеофильмов, которые активно используются при обучении студентов и школьников [12, 13]; Reduction - сокращение количества животных в опыте при условии достижения необходимого экспериментатору статистически достоверного результата [14]. В эффективности последнего направления работы при поиске альтернативных методов исследования мы убедились на практике, использовав при проведении исследований разработанный нами способ электрофизиологического контроля локализации и селективного повреждении мозговых структур [3] Указанный метод, по сравнению со стандартным способом определения координат по стереотаксическому атласу мозга, позволил на порядок сократить число оперированных животных для обеспечения точного попадания в тестируемые структуры мозга и, как следствие, собрать статистически значимые результаты при существенном (многократном) сокращении времени и материальных затрат на проведение экспериментов. Следует отметить, что ранее отдельные исследователи [15] для сокращения количества используемых животных и сохранения идентичных условий при регистрации многочисленных физиологических параметров, свободных от мышечных артефактов, предлагали проводить эксперименты на обездвиженном миорелаксантами животном без перерыва в течение длительного периода времени (недели, месяцы) для сбора как можно большего количества информации в сходных методических условиях. В настоящее время проведение опытов в таких условиях запрещается, так как продолжительная иммобилизация, согласно международным правилам обращения с экспериментальными животными, относится к наиболее травматическим процедурам. Эффективной мерой, направленной на сокращение количества животных в опыте, является выведение и использование животных требуемого стандарта по экологическому и генетическому критериям, способного обеспечить необходимый уровень достоверности и повторяемости, достигаемый в опытах, проведенных на ограниченном количестве животных [14, 16]. Многие исследователи, наряду с инспекторами этических комиссий, считают необходимым при публикации экспериментальных статей, кроме генетического статуса, пола, возраста и веса животного, обязательно указывать его физиологический статус («intrinsic state»), перенесенные заболевания, социобиологический статус животного, а также условия его содержания, кормления, ухода, других экологических параметров, которые значимо влияют на физиологические функции животного и результаты экспериментальных исследований [17, 18]. В этой связи необходимо отметить недопустимость использования в эксперименте отловленных бродячих животных с неизвестной историей их обитания, перенесенных заболеваний и нервно-психических травм. Отметим, что соблюдение принципов вышеуказанной Биоэтической концепции «3R» 24 позволило государствам Европейского Сообщества поставить задачу о сокращении количества используемых в экспериментах животных за период с 1993 по 2000 гг. на 50% [19], которая, по сообщению биоэтической комиссии ЮНЕСКО, была успешно выполнена. Используя возможные альтернативные методы, направленные на сокращение количества животных в опыте, исследователю следует помнить о недопустимости повторного и, особенно, многократного использования животного в травматических экспериментах, что категорически запрещается правилами, разработанными Советом Международных Медицинских Научных Организаций - CIOMS (Council for International Organizations of Medical Sciences). К сожалению, еще находятся недобросовестные физиологи, которые, желая сократить время и расходы на проведение экспериментов, пытаются получить от послушного, хорошо работающего подопытного животного максимум требуемой им информации и повторно оперируют таких высокоорганизованных животных, как собаки и обезьяны, по 3 - 5 и более раз, или подвергают животных многократному действию болевых и других стрессорных агентов. При этом некоторые руководители лабораторий закрывают глаза на подобное обращение с экспериментальными животными и сомнительное качество материала, получаемое у травмированных животных. Следует помнить, что И.П. Павлов, категорически выступал против проведения много-кратных операций на собаках и других животных, говоря о том, что только жестокие люди могут обрекать пережившее тяжелую операцию животное на дальнейшие мучительные страдания и гибель, а проводимые таким образом эксперименты называл «нечистыми» [20, 21] . Важно подчеркнуть, что использование в России принципов Биоэтической концепции «3 R», основанной на внедрении новых, неинвазивных методов исследования дает возможность не только значительно повысить уровень проводимых научных исследований и сократить расходы на экспериментальные исследования, но и может быть предметом активного сотрудничества экспериментаторов с защитниками животных, между которыми в последнее время складываются напряженные отношения [22, 23]. Заметим, что основные принципы Биоэтической концепции «3 R», впервые сформулированные Расселом и Берчем еще в 1958 году, используются научной общественностью Великобритании и других европейских стран как официальное руководство при работе с лабораторными животными. Говоря об истории британского движения в защиту животных следует отметить, что в Британии Королевское общество по предотвращению жестокого обращения к животным (Royal Society for the Prevention of Cruelty to Animals - RSPCA) было основано еще в 1824 году. А в 1876 году при активном участии ученых и общественности британским парламентом впервые в мире был принят закон, направленный на защиту животных, в том числе и лабораторных, от проявлений жестокости (The UK Cruelty to Animals Act, 1876). Этот закон успешно работал до утверждения в 1986 году ныне действующего, более совершенного закона о порядке обращения с лабораторными животными (Animals Scientific Procedures Acts, 1986). Большой вклад в защиту лабораторных животных в Великобритании вносит Университетская федерация по улучшению содержания животных (Universities Federation for Animal Welfare - UFAW), созданная в 1938 году и Фонд замены животных в медицинских экспериментах (Fund for the Replacement of Animals in Medical Experiments -FRAME), который был основан в 1969 году. Кроме деятельности многочисленных общественных и религиозных организаций, поддерживаемых государством, и строгих законодательных норм, которые действуют в Великобритании с 1824 года, существует и историческая причина формирования гуманного отношения британцев к животным. Нужно учитывать, что в Великобритании, в отличие от других европейских государств, в начале 19-го века сильно укоренилось разработанная И. Бентамом (1748-1832) философия утилитаризма -позитивистское направление в этике, согласно которой все действия должны оцениваться с точки зрения их последствий для людей. В частности, к отрицательным последствиям для людей Бентам относил страдания животных, признавая последних существами, чувствующими боль и способными на отрицательные эмоции. Эти воззрения сильно отличались от получивших распространение в Европе философских взглядов Р. Декарта (1596-1650), воспринимавшего организм животного, как хорошо отлаженный рефлексивный механизм (машину), не имеющую, в отличие от человека, души и, следовательно, не ощущающую боли и страданий. Следует отметить, что уважительное отношение к животным в Британии проявляется повсеместно: в отсутствии на улицах брошенных хозяевами собак и кошек, в надлежащем содержании подопытных животных в исследовательских лабораториях, прекрасно оснащенных ветеринарных клиниках и строгом соблюдении правил гуманного обращения с животными при проведении экспериментов. Проведение экспериментов на собаках и кошках в Британии проводятся в исключительных случаях и только при использовании неинвазивных методов исследования, чтобы не травмировать британцев, содержащих дома этих животных. В других европейских странах опыты тоже проводятся, в основном, на грызунах и других более низкоорганизованных животных [24] и наука от этого не проигрывает, а вот нравственное воспитание личности получает несомненный выигрыш. Британцы считают, что человек, у которого воспитано чувство эмпатии (сочувствия, сопереживания) при общении с домашними животными, сохранит это чувство и при общении с окружающими его людьми. Следует отметить, что преступления против человеческой личности зависят от нравственного воспитания личности (включая гуманное отношение к животным), что неоднократно подтверждалось статистическими данными по тяжким преступлениям, совершаемых в европейских государствах. Так, в начале 20 века на миллион жителей Англии приходилось всего шесть убийств, Германии - двенадцать, а в Испании, известной своими «спортивными» зрелищами с истязанием животных, - восемьдесят три [25]. Британцы убеждены, что уважение к человеческой личности следует воспитывать с гуманного отношения к животным в быту, зоопарках, ветеринарных клиниках и исследовательских институтах, в которых проводят опыты на животных. 25 Несколько слов об отечественной истории становления общественной организации, направленной на защиту животных от жестокого обращения. В России предложение об образовании в Петербурге Общества Покровительства Животным принадлежало гласному городской Думы Петру Владимировичу Жуковскому, который в 1865 году был выбран его председателем и бессменно работал на этом посту до 1890 года, удостоившись звания Действительного Статского Советника, Камергера Двора Его Императорского Величества, награжденного, как и многие другие активные члены общества, Высочайшими государственными наградами и орденами. Уже один карьерный рост председателя правления общества П.В. Жуковского свидетельствует о высоком престиже Российского Общества Покровительства Животным и о том внимании и поддержке, которое государственные власти оказывали этому обществу. Согласно Уставу данного Общества, принятому в 1865 году, защита животных, в то числе и лабораторных, должна являться главным рычагом подъема нравственности в Российском обществе [25, 26]. Были разработаны рекомендации по обращению с животными, используемыми в научных целях, проводились регулярные инспекции по проверке их исполнения и обучению персонала лабораторий обращению с лабораторными животными. Члены Общества выступали против неоправданной публичной демонстрации животных, подвергающихся травматическим хирургическим операциям и болевым экспериментальным воздействиям [27]. При знакомстве с содержанием Журнала «Защита Животных», ежемесячно издаваемого Российским Обществом Покровительства Животных, поражает количество разнообразных образовательных, научных, благотворительных и практических мероприятий, проводимых его членами. К сожалению, после октябрьского переворота деятельность Российского Общества Покровительства Животным была прекращена, журнал упразднен и с тех пор научные сотрудники, выполняющие экспериментальные исследования на животных, вынуждены рук-водствоваться в своей практической деятельности лишь «здравым смыслом» и устаревшими краткими ведомственными инструкциями, имеющими рекомендательный характер. Наиболее полным из этих документов является приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 [28], регламентирующий правила содержания животных, проведения экспериментальных процедур и последующей эвтаназии. Однако этот документ нуждается в корректировке в соответствии с принципами принятой международной Биоэтической концепции «3R», а также в подзаконных актах, определяющих обязательный контроль за исполнении его правил. Напомним, что Закон РФ о защите животных от жестокого обращения, который предусматривает необходимый контроль и юридическую ответственность за нарушение разработанных законом правил, до сих пор не принят, несмотря на неоднократные попытки представления соответствующих проектов в Государственную Думу РФ [29]. К сожалению, депутаты не учитывают, что принятие вышеуказанного закона необходимо не только и не столько экспериментаторам, фармакологическим и промышленным компаниям, использующих животных, сколько всему нашему обществу для его нравственного оздоровления и воспитания подрастающего поколения. Следует признать, что в России, по сравнению с Британией и другими европейскими странами, ветеринарные учреждения и экспериментальные институты недостаточно финансируются и иногда не имеют необходимую аппаратуру для проведения исследований и лечения животных. Животные в вивариях часто содержатся ненадлежащим образом, что некоторые сотрудники оправдывают отсутствием средств. Известно, что этические комитеты по работе с животными в некоторых научных учреждениях работают недостаточно активно, лицензирование и этическая экспертиза научных проектов проводится неудовлетворительно, что нельзя объяснить отсутствием денежных средств. Некоторые руководители не уделяют необходимого внимания разработке и внедрению неинвазивных приборов и устройств для исследования и хирургического лечения животных, не учитывают того, что проводя опыты и операции на животных без использования неинвазивных методов исследования экспериментаторы тяжело травмируют животных, вызывая у них неконтролируемые стрессорные реакции, сопровождающиеся грубым нарушением нормальных физиологических функций животных, а следовательно, ставят под сомнение результаты проведенных ими исследований. Недобросовестность и небрежное отношение исследователей к этике проводимых экспериментальных исследований в соответствии с принятыми Международными правилами, а также ненадлежащее содержание животных в вивариях, по мнению член-корреспондента РАН Б.Г. Юдина, нередко приводит к тому, что российские ученые не могут получить финансирование от международных научных организаций, пригласить зарубежных ученых для проведения совместных исследований в российские институты, а статьи многих наших исследователей не принимаются к публикации и не переводятся в авторитетных международных научных журналах [30]. Ряд отечественных ученых уверены, что разработку и внедрение неинвазивных, нетравматических методов исследования в научно-исследовательских институтах необходимо проводить вместе с решительным преодолением равнодушия отдельных исследователей к страданиям подопытных животных [29, 31]. Принятие в 2010 году Европарламентом «Директивы по защите животных, используемых в научных целях» [8], выполнение которой является обязательным для всех государств Европы, включая Россию, дает основание предполагать, что исследования в нашей стране будут проводиться в сравнимых с западноевропейскими стандартами условиях и имеющиеся проблемы, связанные с использованием подопытных животных в наших лабораториях, со временем будут разрешены. В качестве положительного примера можно отметить Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова, имеющий международный сертификат AAALAC Inter-national (Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care), который подтверждает, что их лаборатории проводят исследования на животных в соответствии с принятой Международной Биоэтической Конвенцией, отдающей приоритет разработке и применению неинвазивных методов исследования, что позволяет сотрудникам без 26 ограничений осуществлять сотрудничество с зарубежными учеными. Заслуженным авторитетом пользуются лабораторный питомник этого института (г. Пущино-на-Оке), а также питомник по разведению животных Научного центра биомедицинских технологий ФМБА РФ «Андреевка» (Солнечногорский район, МО), соблюдающие необходимые международные стандарты по селекции и по-ставке лабораторных животных, что является важным условием для получения надежных и воспроизводимых результатов экспериментальных исследований. Хочется надеяться, что научно-исследовательские учреждения будут активно участвовать в разработке и внедрении неинвазивных технологий в соответствии с принципами Биоэтической концепции «3 R», направленных на повышение уровня проводимых научных исследований. Каждому экспериментатору следует помнить, что при соблюдении этических правил при работе с экспериментальными животными он получает двойное вознаграждение: сохраняет себя как нравственную личность, а также сохраняет нормальными физиологические функции животного, что позволяет получить достоверные результаты экспериментальных исследований, создает благоприятные условия для исследования, лечения и последующей реабилитации поопытных животных, а также существенно сокращает количество животных, используемых в эксперименте.